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脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染法的原理說明

更新時間:2018-02-07  |  點擊率:2386
   脂質(zhì)體2000是陽離子脂質(zhì)體N-[1-2,3-Dioleyoxy, Propyl]-n, n,n-Trimethylammonium Chloride(DOTMA)和Dioleoyl photidye-thanolamine(DOPE)的混合物[1:1(w/w)]。它適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細胞中,是目前條件下zui方便的轉(zhuǎn)染方法之一。轉(zhuǎn)染率高,優(yōu)于磷酸鈣法,比它高5~100倍,能把DNA和RNA轉(zhuǎn)染到各種細胞。

  用LR進行轉(zhuǎn)染時,首先需優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件,應(yīng)找出該批LR對轉(zhuǎn)染某一特定細胞適合的用量、作用時間等,對每批LR都要做:*,先要固定一個DNA的量和DNA/LR混合物與細胞相互作用的時間,DNA可從1~5μg和孵育時間6小時開始,按這兩個參數(shù)繪出相應(yīng)LR需用量的曲線,再選用LR和DNA兩者*的劑量,確定出轉(zhuǎn)染時間(2~24小時)。因LR對細胞有一定的毒性,轉(zhuǎn)染時間以不超過24小時為宜。

  細胞種類:COS-7、BHK、NIH3T3、Hela和Jurkat等任何一種細胞均可作為受體細胞。

  脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染方法原理

  脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染方法原理:脂質(zhì)體2000作為體內(nèi)和體外輸送載體的工具,已經(jīng)研究的十分廣泛,用合成的陽離子脂類包裹DNA,同樣可以通過融合而進人細胞。使用脂質(zhì)體將DNA帶人不同類型的真核細胞,與其它方法相比,有較高的效率和較好的重復(fù)性。

  中性脂質(zhì)體是利用脂質(zhì)膜包裹DNA,借助脂質(zhì)膜將DNA導(dǎo)入細胞膜內(nèi)。帶正電的陽離子脂質(zhì)體,DNA并沒有預(yù)先包埋在脂質(zhì)體中,而是帶負電 的DNA自動結(jié)合到帶正電的脂質(zhì)體上,形成DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物,從而吸附到帶負電的細胞膜表面,經(jīng)過內(nèi)吞被導(dǎo)入細胞。

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